IBL百日咳桿菌IgG檢測(cè)試劑
 

1. 用途

酶聯(lián)法定性及定量測(cè)定人血清/血漿中百日咳桿菌毒素(PT) IgG 抗體水平。

2. 摘要

百日咳是一種由百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）引起的呼吸道疾病，可以通過空氣傳播傳播。 革蘭氏陰性桿菌會(huì)產(chǎn)生一系列生物活性分子，這些化合物或在致病或在針對(duì)百日咳的免疫過程中出現(xiàn)，并表現(xiàn)出不同的影響。其中百日咳毒素（pt）、絲狀血細(xì)胞凝集素（fha）和不同脂多糖（lps）等已進(jìn)行了表征研究。

百日咳顯示高傳播率（未接種疫苗的家庭成員的感染率超過 90％）并且可導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，特別是對(duì)于幼兒。從1980 年至 1989 年一年內(nèi)的 10749 名患者中，69％被送入醫(yī)院，22％患有肺炎，0.9％患有腦病，0.6％死于肺炎。對(duì)于年齡較大的兒童和成人（包括已接種疫苗的人）也通過不明顯支氣管炎或上呼吸道發(fā)炎觀察到感染。無癥狀的病例也很常見。

百日咳疾病或百日咳疫苗免疫后的血清學(xué)反應(yīng)采用凝集試驗(yàn)、沉淀素，補(bǔ)體結(jié)合和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 測(cè)定。 對(duì)于 ELISA 測(cè)定，博德特氏菌抗原（包括毒素，FHA 和 LPS, U/ml）與固相支持物結(jié)合，方法靈敏、易于操作，測(cè)定單一血清的血清陽性并通過測(cè)定IgM 和 IgA 來判斷近博德特氏菌感染情況。

與其他博德特氏菌屬蛋白相比，百日咳毒素（PT）具有高度特異性。 PT 也是眾多疫苗的組成部分。

3. 檢測(cè)原理

基于夾心法固相酶聯(lián)吸附檢測(cè)（ELISA）原理。微孔板空中包被抗原，樣品中含有針對(duì)抗原特異結(jié)合抗體（人IgG）則可以通過二次酶聯(lián)抗體（E-Ab）檢測(cè)到，加入顯色底物，酶解反應(yīng)顯色，顏色深淺與檢測(cè)吸附的 IgG 水平成正比，以此通過顏色判斷樣品中IgG 的存在，并通過標(biāo)曲定量測(cè)定IgG 的濃度水平。

4. 注意事項(xiàng)

1. 僅供研究專業(yè)用途使用。

2. 檢測(cè)前，完整仔細(xì)閱讀隨試劑盒內(nèi)附的有效版本說明書，確保充分理解全部?jī)?nèi)容。

3. 若試劑盒包裝破損，請(qǐng)于收到試劑盒一周內(nèi)書面聯(lián)系 IBL 或供貨商。不要使用破損的試劑進(jìn)行檢測(cè)。

4. 采用同批次同效期試劑進(jìn)行檢測(cè)，不同批次的試劑不得混用。不要使用過期試劑。

5. 遵守良好實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范及安全指南，必要時(shí)穿戴實(shí)驗(yàn)服、一次性乳膠手套及護(hù)目鏡。

6. 試劑盒中有害成分接觸后可能刺激眼睛和皮膚。詳情見盒內(nèi)材料（MATERIALS SUPPLIED） 及標(biāo)簽。另外，IBL 網(wǎng)上也提供了產(chǎn)品相關(guān)《Material Safety Data Sheets》供下載，或直接尋求 IBL 索取。

7. 化學(xué)品及制備或使用過的試劑必須當(dāng)作有害廢物依照國(guó)家生物有害及安全指南或法規(guī)進(jìn)行處理。

8. 清潔人員在處理潛在有害物品時(shí)應(yīng)有專業(yè)人士指導(dǎo)。

9. 避免接觸終止液，否則可能引起皮膚過敏及灼傷。

10. 部分試劑含疊氮鈉(NaN3) 防腐劑。若接觸眼睛或皮膚，立即用水沖洗。NaN3 可與鉛和銅管發(fā)生反應(yīng)形成具有爆炸性的疊氮金屬物。因此，處理試劑時(shí)，要用大量水沖洗避免疊氮物質(zhì)的積累。

11. 試劑盒中含有人血清或血漿的試劑均經(jīng)過檢測(cè)，顯示抗 HIV I/II、HBsAg 及 抗 HCV 均為陰性。盡管如此， 但不能排除這些及其他傳染因子的存在，因此使用及處理時(shí)，應(yīng)按潛在生物有害物處理。

5. 保存及穩(wěn)定性

試劑盒常溫條件運(yùn)輸，保存應(yīng)在 2-8 °C。遠(yuǎn)離熱源或陽光照射。樣本及制備試劑的保存與穩(wěn)定性在后面相應(yīng)章節(jié)有述。

未開封的試劑在注明的效期內(nèi)穩(wěn)定。試劑盒初次開封后，微孔板裝在密封袋密封及試劑瓶蓋緊放在 2-8 °C 可以穩(wěn)定保存 3 個(gè)月。

6. 樣品采集與保存

血清、血漿 (EDTA, 肝素處理)

8. 需要但未提供的實(shí)驗(yàn)材料

1. 微量移液器 (Eppendorf 多通道移液器或類似產(chǎn)品, < 3% CV)，量程： 5、 50、100、500 µL

2. 校正過的檢測(cè)裝置

3. 用于樣品稀釋的管子 (1 mL)

4. 8 通道微量移液器，及試劑儲(chǔ)槽

5. 洗瓶、自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)

6. 酶標(biāo)儀，可以讀取 450 nm (校正波長(zhǎng) 600-650 nm) 的吸光值

7. 雙蒸水或去離子水

8. 吸水紙巾、移液槍頭、計(jì)時(shí)器

9. 操作注意事項(xiàng)

1. 任何不當(dāng)處理樣品或修改測(cè)試程序都可能影響結(jié)果。 要求的移液量、孵育時(shí)間、溫度和預(yù)處理步驟必須嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。 僅使用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器和檢測(cè)設(shè)備。

2. 測(cè)試開始后，所有步驟都應(yīng)該不間斷地完成。 確保在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間準(zhǔn)備好所需的試劑、材料和設(shè)備。 允許所有試劑和樣品達(dá)到室溫（18-25oC），并在使用前輕輕旋轉(zhuǎn)每瓶液體試劑和樣品。 混合試劑不要起泡。

3. 避免污染試劑，移液器和孔/管。 為每個(gè)組份和樣品移取時(shí)使用新的一次性塑料移液器吸頭。 瓶蓋不要互換。未使用的試劑瓶要始終蓋上。 不要使用用過的板孔/試管或試劑。

4. 使用移液方案驗(yàn)證合適的板布局。

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